近年來(lái)，基因工程小鼠模型已被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究，然而許多基因工程小鼠由于各種各樣的原因出現(xiàn)了不能生育或?yàn)l臨死亡等問(wèn)題，這直接影響了科研工作的順利進(jìn)行。針對(duì)某些基因工程鼠繁育困難的問(wèn)題，以體外受精為代表的輔助生殖技術(shù)受到廣泛關(guān)注。1968年Whittingham最先報(bào)道了小鼠體外受精成功獲得后代，經(jīng)過(guò)半個(gè)世紀(jì)的努力，目前小鼠體外受精技術(shù)已日臻完善。下面，就跟著小編一起來(lái)了解一下吧。
進(jìn)行體外受精可使用新鮮精子，也可使用凍存后復(fù)蘇的精子，兩種方法中鮮精的受精率較高，但是需要提供12-14w的健康雄鼠，將精子復(fù)蘇進(jìn)行體外受精可以不受活體鼠的限制，避免了飼養(yǎng)小鼠的麻煩?，F(xiàn)將兩種方法作一介紹。
鮮精體外受精：
取4-5w雌鼠，下午5點(diǎn)腹腔注射5.0 IU的PMSG，48h后注射5.0 IU的HCG，然后準(zhǔn)備受精液滴，獲能液滴（均蓋油），放于培養(yǎng)箱內(nèi)過(guò)夜平衡。把ICR小鼠和結(jié)扎雄鼠合籠，第二天檢假孕鼠。
次日上午7點(diǎn)處死雄性小鼠，取出附睪，將附睪放入預(yù)先準(zhǔn)備好的精子獲能液中，用精細(xì)鑷將精子團(tuán)擠出完全后，把廢棄的組織塊挑出棄去，然后把精子獲能皿放入培養(yǎng)箱中獲能1h。
取小鼠輸卵管，用礦物質(zhì)油將血漬清洗干凈。在受精滴旁邊油中，用精細(xì)攝將輸卵管膨大部撕開(kāi)，把“云霧團(tuán)”引入受精滴中。
精子獲能結(jié)束后，把10μl精液加入受精滴，然后把培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行受精。
6-7h后，將胚胎從受精滴中挑出，清洗干凈，放入KSOM培養(yǎng)滴中培養(yǎng)，可當(dāng)天看原核或者次日看2細(xì)胞胚胎的發(fā)育情況。
取假孕鼠，每只假孕鼠移入15個(gè)胚胎，等待代孕鼠生產(chǎn)。
精子獲能動(dòng)態(tài)圖
凍精體外受精
取4-5w雌鼠，下午5點(diǎn)腹腔注射5.0 IU的PMSG，48h后注射5.0 IU的HCG，然后準(zhǔn)備（用HTF做100μl的培養(yǎng)滴，覆蓋礦物油），放于培養(yǎng)箱內(nèi)過(guò)夜平衡。把ICR小鼠和結(jié)扎雄鼠合籠，第二天檢假孕鼠。
次日上午7點(diǎn)處死雌鼠，取小鼠輸卵管，用礦物質(zhì)油將血漬清洗干凈。
在受精滴旁邊油中，用精細(xì)攝將輸卵管膨大部撕開(kāi)，將云霧團(tuán)引入受精滴中。
從液氮中取出脈管，在空氣中停留40″，然后將脈管投入37℃水中，待凍存液融化，將含有精子的凍存液吹入解凍液中，3000r，離心3min，棄去上清液，得到精子。倒置顯微鏡下觀察精子活力。將10μl精液加入受精滴中進(jìn)行受精。
6-7h后，將胚胎從受精滴中挑出，清洗干凈，放入KSOM培養(yǎng)滴中培養(yǎng)，可當(dāng)天看原核或者次日看2細(xì)胞胚胎的發(fā)育情況。
取假孕鼠，每只假孕鼠移入15個(gè)胚胎，等待代孕鼠生產(chǎn)。
體外受精圖
注意事項(xiàng)：
雌鼠注射HCG后，14-16h處死雌鼠，過(guò)早胚胎未成熟，過(guò)晚胚胎老化，都會(huì)影響受精率。
體外受精作為輔助生殖的一種，在很大程度上幫助基因工程鼠繁育，但是體外受精成功與否受許多因素的影響，比如小鼠的日齡（4w），試劑穩(wěn)定性，取卵時(shí)間等，要想使受精率較高，還需要結(jié)合自己實(shí)驗(yàn)室的情況進(jìn)行摸索。
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