?主要內(nèi)容：
?一、分析方法的驗證與確認概述
?二、分析方法的驗證和確認的區(qū)別與聯(lián)系
?三、分析方法的驗證與確認在實踐中的具體應用
?四、不同的檢驗項目在進行分析方法驗證或分析方法確認時須進行的驗證或確認內(nèi)容參考
?五、注意事項
一、分析方法的驗證與確認概述
任何分析測試的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準確的數(shù)據(jù)。在藥品的生產(chǎn)過程中，從原料、中間體到成品都需要檢驗，檢驗的結(jié)果既是過程受控的依據(jù)，也是評價產(chǎn)品質(zhì)量的重要手段。而分析方法的驗證與確認結(jié)果可以用于判斷分析結(jié)果的質(zhì)量、可靠性和一致性，這也是所有分析質(zhì)量管理體系不可分割的一部分。
許多法規(guī)和質(zhì)量管理標準也要求實驗室進行分析方法驗證。
相關(guān)法規(guī)的要求：
·美國食品藥品管理局（USFDA）制定了兩個行業(yè)指南，分別是分析方法驗證和是生物分析方法驗證。
·ICH（人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議）出版了兩個方法驗證指南。Q2A給出了驗證中必須考慮的8種驗證參數(shù)的術(shù)語和定義。Q2B中包含了方法學內(nèi)容，但是同時聲明允許一定的靈活性：“申請人有責任選擇最適合其產(chǎn)品的驗證步驟和方法?！?span>
·EURACHEM出版了方法驗證的詳細指南，分析方法的適用性方法驗證及相關(guān)主題的實驗室指南。這是最詳盡的官方指南，包含了方法驗證的理論和實踐。
相關(guān)法規(guī)的要求：
我國2010版GMP第二百二十三條也明確規(guī)定：符合下列情形之一的，應當對檢驗方法進行驗證：
1、采用新的檢驗方法；
2、檢驗方法需變更的；
3、采用《中華人民共和國藥典》及其他法定標準未收載的檢驗方法；
4、法規(guī)規(guī)定的其他需要驗證的檢驗方法對不需要進行驗證的檢驗方法，企業(yè)應當對檢驗方法進行確認，以確保檢驗數(shù)據(jù)準確、可靠。
二、分析方法的驗證和確認 的區(qū)別與聯(lián)系
對于分析方法的驗證和確認，存在很多有關(guān)這兩個術(shù)語的討論，它們也經(jīng)常被交叉互用。USP32通則<1225>和<1226>中解釋了這兩個術(shù)語的差異。通則<1225>的標題是：“法定方法的驗證”。它闡述了分析方法的驗證，包括從建立方法開始的所有驗證參數(shù)，結(jié)果得到某一特定樣品的驗證方法。這一過程建議用于內(nèi)部制定方法的驗證。通則<1226>題為“法定方法的確認”。它建議在應用法定方法時，應證明實驗室有能力成功應用該方法。在方法轉(zhuǎn)移時，接受方法的實驗室也應進行方法確認。
驗證分析方法的目的是證明“預期目標的適用性”。分析測量的目的是產(chǎn)生準確可靠的數(shù)據(jù)。只有方法驗證無法保證這一目標的實現(xiàn)，但是應當將其作為分析測量質(zhì)量保證體系的一部分。USP通則<1058>分析儀器確認中明確提出了這一點。該通則開頭部分討論了實驗室數(shù)
據(jù)質(zhì)量的不同要素的重要性，其中還解釋了為何系統(tǒng)適用性試驗或質(zhì)量控制圖的分析不足以確保分析檢測結(jié)果的準確可靠，儀器確認和方
法驗證同樣重要。
從以上可以看出，分析方法的驗證與確認是不可分割的，確認是驗證的一部分，它們本質(zhì)上是相同的概念，具體來說分析方法的驗證是證明檢驗方法或操作規(guī)程能達到預期結(jié)果的一系列活動，分析方法的確認是證明檢驗設備能正確運行并可達到預期結(jié)果的一系列活動。
三、分析方法的驗證與確認在實踐中的具體應用
1、什么情況下進行分析方法的驗證？
（1）新藥申報時，藥品質(zhì)量標準中分析方法必須驗證；
（2）藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質(zhì)量標準分析方法必須進行驗證2010版藥典中分析方法驗證指導原則只規(guī)定了項目和基本方法而沒有合格標準:附錄XIXA；中國GMP(2010版))非常關(guān)注驗證的過程,題分析方法驗證不完善是常見的問題。
2、分析方法驗證成功的前提條件：
（1）儀器已經(jīng)確認、校正并在有效期內(nèi)
（2）經(jīng)過培訓的人員
（3）可靠穩(wěn)定的對照品
（4）可靠穩(wěn)定的實驗試劑
（5）確認受試溶液的穩(wěn)定性，在規(guī)定時間內(nèi)無降解。
3、分析方法學驗證所要求驗證的內(nèi)容：
（1）含量的測定（GC或HPLC方法驗證）
（2）雜質(zhì)的含量測定（GC或HPLC方法驗證）
（3）藥物的定性鑒定
（4）藥物的含量均勻度測定
（5）藥物的微生物檢測
（6）藥物的細菌內(nèi)毒素的檢測
4、新申報產(chǎn)品的GC或HPLC方法驗證
4.1選擇性（或?qū)傩裕?span>
選擇適當?shù)膬x器、相應條件、試劑（包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱，流動相配比等），使原料藥生產(chǎn)工藝中可能存在的雜質(zhì)（包括原料，中間體，前體及降解產(chǎn)物）或制劑生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)能與主峰較好地分開，并確保主成份峰中沒有其他干擾物質(zhì)峰存在，對其檢驗的專屬性進行評價和確認。
可接受的標準為：空白對照應無干擾，雜質(zhì)峰與主峰應能完全分離，分離度不得小于1.5。
4.2精密度
4.2.1系統(tǒng)精密度
通過對單個測定值與平均值之間的偏差程度來衡量系統(tǒng)的誤差。對同一均勻的樣品溶液或標準品溶液，連續(xù)重復進樣六次，記錄每次進樣后各組分的響應，峰面積或峰高，計算各響應值與平均值之間的偏差——相對標準偏差RSD。
可接受的標準為：RSD??2.0%。
4.2.2方法精密度
通過測定樣品含量與真值（平均值）的偏差程度來衡量樣品制備過程（包括稱量，稀釋）中的誤差。分別對同一批號的樣品稱量六次，按含量測定方法測定其含量，計算每一單一含量與平均含量之間的相對標準偏差RSD。
可接受的標準為：除另有規(guī)定外通RSD不大于2.0%。
4.2.3中間精密度
4.2.3.1按驗證確定的方法，同一人用同一儀器檢測三批樣品，每間隔24小時以上，測定一次，共測定33次。
4.2.3.2由兩人使用不同的儀器分別檢測同三批樣品。
可接受的標準為：相對標準差均應不大于2.0%。
4.3方法的線性范圍
4.3.1在含量測定濃度的80～120%選擇五個不同的濃度點，每一個濃度需測定二次，記錄各對應濃度下的相應響應值（峰高，峰面積或峰
面積的比值），以衡量樣品量與檢測器響應間的線性對應關(guān)系。
4.3.2可接受標準：相關(guān)系數(shù)rr≥0.999
4.3.3在HPLC法有關(guān)物質(zhì)測定時，測定濃度從總雜質(zhì)120%至LOQ（定量限）濃度選取五個點，每個濃度點測定二次。GC法殘留溶劑測定時，測定濃度從殘留溶劑限度的120%至LOQ濃度選取五個點，每個濃度點測定二次。
可接受標準：相關(guān)系數(shù)rr≥0.990
4.4方法的準確度
衡量該方法的實測結(jié)果與真實值的吻合程度，即方法的回收率。
4.4.1含量方法的準確度：取已知濃度的樣品（濃度范圍為含量測定濃度的80%、100%、120%）各三份，每份進樣測定三次，計算該方
法的百分回收率。
可接受標準：回收率在98％～102％之間
4.4.2用HPLC法進行有關(guān)物質(zhì)測定準確度試驗：一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標準中該雜質(zhì)的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1％、0.2％和0.3％的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，并計算99個回收率數(shù)據(jù)的相對標準差（RSD）。
該項目的可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在80%--120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%--130%，相對標準差應不大于10%
4.4.3GC法殘留溶劑準確度試驗，取殘留溶劑限度的LOQ、50%、100%、120%四個濃度點（也可根據(jù)產(chǎn)品質(zhì)量情況選擇其他點）溶液，若樣品測定濃度值低于限度值的10%時，應增加測定限度的10%的濃度點溶液。加入樣品中，每個濃度點測定三次，計算扣除樣品濃度后的百分回收率。
4.5最低檢測限
4.5.1儀器能檢測到樣品中各組分的最低檢測濃度，不需定量。
4.5.2操作 在儀器系統(tǒng)性實驗符合檢測要求的條件下，測定三次空白樣品，洗脫時間需用覆蓋整個樣品中所有組分的流出。計算平均噪聲水平。根據(jù)產(chǎn)品檢驗規(guī)程規(guī)定的檢測濃度配制梯度濃度，單針進樣。當信噪比為3.0±1.0，確定該濃度為待確定的最小檢測限。將該濃度溶液重復進樣三次，若三次所得圖譜的信噪比均為3.0±1.0，則確定該濃度為最小檢測限。
4.6最小定量限
能夠重復的、準確的測量峰面積（相當于供分析物）的進樣量。峰高等于噪聲高的10.0±1.0。
4.6.2操作：按檢測限方法測定儀器的平均噪聲，按最小檢測限操作方法操作，將按信噪比為10.0±1.0的濃度定為最小定量限。
4.7方法耐用性（僅在新申報產(chǎn)品的方法的第一次驗證時進行）HPLC法，方法耐用性要求進行改變流動相比例和流動相PH值的測試，主要考察原料藥生產(chǎn)工藝中可能存在的雜質(zhì)（包括原料中間體、前體及降解產(chǎn)物）與成品主峰的分離度達到要求，并確保成品主峰中沒有
干擾峰存在，同時觀察雜質(zhì)峰的出峰順序是否發(fā)生變化。GC法，方法耐用性要求進行改變柱溫和載氣流速測試，主要考察所有殘留溶劑峰之間的分離度是否仍達到標準要求。
4.8溶液穩(wěn)定性
HPLC法，將配制好的溶液每隔半小時進樣一次，連續(xù)進樣55次（即放置兩小時），比較含量和有關(guān)物質(zhì)的變化。
可接受的標準為：主成分的含量變化的絕對值應不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1％以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)。
5藥典、客戶提供的檢驗方法的轉(zhuǎn)移應用確認
對新產(chǎn)品的方法驗證通常在產(chǎn)品開發(fā)階段完成；大規(guī)模生產(chǎn)后的驗證通常包括方法確認移和方法轉(zhuǎn)移。分析方法確認是指當國家標準或藥典標準已經(jīng)變化時在本實驗室進行的對所涉及產(chǎn)品是否適用的確認實驗。確認之前應對新舊方法進行核對，標明所有變更細節(jié)檢驗樣品的信息（批號、規(guī)格),變更項目的接收標準確認試驗的樣品通常包括正常產(chǎn)品、穩(wěn)定性產(chǎn)品。方法轉(zhuǎn)移指檢驗方法由轉(zhuǎn)移方轉(zhuǎn)移至接驗收方時進行的實驗。
5.1方法選擇性
選擇適當?shù)膬x器、試劑（包括儀器型號、
GC或HPLC色譜柱，流動相配比等）使原料藥生
產(chǎn)工藝中可能存在的雜質(zhì)（包括原料，中間體，
前體及降解產(chǎn)物）與成品較好地分開，并確保
成品峰中沒有其他干擾物質(zhì)峰存在。
5.2系統(tǒng)適應性
按藥典方法及客戶方法規(guī)定操作。
5.3系統(tǒng)精密度、最小檢測限、最小定量限、耐用性、溶液穩(wěn)定性等分別按4.2.1、4.5、4.6、4.7及4.8操作。
5.4樣品對比檢驗：對公司自我生產(chǎn)的三批產(chǎn)品與轉(zhuǎn)讓方生產(chǎn)的產(chǎn)品最少一批同條件下進行檢驗，應均符合相應質(zhì)量標準要求。
四、不同的檢驗項目在進行分析方法驗證或分析方法確認時須進行的驗證或確認內(nèi)容參考下表：
四、不同的檢驗項目在進行分析方法驗證或分析方法確認時須進行的驗證或確認內(nèi)容總結(jié)
（1）鑒別試驗除專屬性、耐用性外，其它都不要求。
（2）含量測定方法驗證除檢測限、定量限外，其它都要求做，確認主要要考察方法的耐用性，精密度和專屬性可示情況而定。
（3）雜質(zhì)的限度檢查方法的驗證與確認除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求
（4）雜質(zhì)的定量測定方法驗證除檢測限外，其它都要求，其確認也要考察專屬性、精密度、LOQ、耐用性等。
五、注意事項
5.1在分析方法驗證前，應確保分析儀器設備經(jīng)過確認并處于其校驗有效期內(nèi)。
5.2試驗過程應詳細記錄,包括色譜條件，樣品、對照品、所用試劑的來源，含量，稱量值,稀釋過程,簡要操作方法,儀器型號，計算公
式及結(jié)果，必要的數(shù)據(jù)統(tǒng)計等。
5.3已驗證過的分析方法的任何修改都應當保存完整的記錄，包括修改的原因和相關(guān)數(shù)據(jù)說明，用來證明該修改后的方法和規(guī)定的方法同
樣準確可靠。
聯(lián)系客服
