干化學(xué)法尿蛋白、比重和pH的檢測原理都是基于pH的變化而設(shè)計(jì)的,這是pH、尿蛋白和比重之間相互影響的根源。pH 5.0~7.0的正常尿液對尿蛋白和尿比重?zé)o影響,過低的強(qiáng)酸性尿液幾乎不存在。因此,需要我們引起足夠重視的是pH值升高的強(qiáng)堿性尿。pH升高的病理因素包括堿中毒、原發(fā)性醛固酮增多癥、變形桿菌和銅綠假單胞桿菌引起的膀胱炎、腎盂腎炎等尿路感染。許多藥物如枸櫞酸鈉、嘧啶、碳酸類藥物及某些中草藥??梢鹉蛞簆H值不同程度的升高。強(qiáng)堿性尿?qū)Ρ戎氐挠绊懼饕悄蛞褐械腛H-中和了一部分H+,引起膜塊上的pH改變導(dǎo)致比重結(jié)果降低。實(shí)驗(yàn)室檢測pH超過7.0時,在原尿比重基礎(chǔ)上應(yīng)增加0.005,超過8.0時增加0.010。pH>8.5時,對儀器報(bào)告的尿蛋白陽性標(biāo)本均應(yīng)通過其他方法加以證實(shí)。而作為兩性電解質(zhì)的蛋白質(zhì),本身可電離出H+,與Na+從多聚電解質(zhì)中解離出來的H+共同作用于尿比重膜塊上的指示劑,發(fā)生顯色反應(yīng),使比重檢測結(jié)果偏高。
藥物具有生物活性,藥物本身及其代謝產(chǎn)物干擾尿液測定的現(xiàn)象并非少見。臨床治療中濫用抗生素的現(xiàn)象時有發(fā)生,許多新藥對臨床檢驗(yàn)的干擾還尚未發(fā)現(xiàn)。藥物對尿液檢查的影響給實(shí)驗(yàn)室檢查和臨床診斷增添了許多困難。
青霉素是臨床最常用的抗生素,滴注后76%于6 h內(nèi)以原形從尿中排出。青霉素結(jié)構(gòu)中含有類似蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中的肽鍵,可使磺柳酸法結(jié)果增強(qiáng),而干化學(xué)法結(jié)果減弱。干化學(xué)法是基于試紙帶膜塊上pH值的變化。青霉素分子結(jié)構(gòu)中的-COOH可電離出H+,可能通過H+影響pH值的變化而導(dǎo)致尿蛋白的陽性減弱。因此,靜脈滴注青霉素最好5~6 h后再做尿液檢查,對蛋白尿患者使用青霉素治療時,不同的測定方法應(yīng)考慮不同的干擾作用,干化學(xué)法可使結(jié)果減弱甚至為假陰性。氧哌嗪青霉素僅影響磺柳酸法尿蛋白的測定,而不影響干化學(xué)法的檢測。氧哌嗪是青霉素的衍生物,靜滴后主要以原形從尿中排出。氧哌嗪分子結(jié)構(gòu)中含有兩個牢固結(jié)合的肽鍵,與磺柳酸可發(fā)生明顯的結(jié)合,產(chǎn)生類似尿蛋白的假陽性反應(yīng)。因此,遇到磺柳酸法尿蛋白強(qiáng)陽性,與儀器檢測或顯微鏡檢查明顯不符時,應(yīng)詳細(xì)詢問病情,了解用藥史,及時反饋給臨床。
維生素C是最常用的維生素類藥物。本藥水溶性好,口服或滴注后體內(nèi)代謝快,尿中濃度迅速升高。維生素C具有較強(qiáng)的還原性,對尿液成分測定的影響機(jī)制可理解為競爭性抑制反應(yīng),使結(jié)果減弱或出現(xiàn)假陰性。一般認(rèn)為,常規(guī)劑量口服維生素C對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響,而大劑量口服特別是靜脈滴注時,30 min內(nèi)尿中濃度即迅速升高,隨著尿液的濃縮其濃度不斷上升。高濃度的維生素C可影響尿中葡萄糖、隱血、膽紅素和亞硝酸鹽的測定。不同濃度的維生素C對尿液檢查的影響不同,同樣濃度的維生素C對尿液中不同成分的影響也不相同,不同批號的試紙抗維生素C的干擾不同。從事尿液分析的檢驗(yàn)人員,應(yīng)參照本實(shí)驗(yàn)室的儀器和試紙,建立健全維生素C在多大濃度范圍內(nèi)才對以上實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響及影響程度如何,選擇維生素C滴注后的最短取尿時間。
4.1 干化學(xué)測定與白細(xì)胞顯微鏡檢查的關(guān)系 干化學(xué)法白細(xì)胞檢查的原理是依賴于白細(xì)胞漿內(nèi)粒細(xì)胞酯酶的存在。該酶作用于試紙膜塊上的吲哚酚酯游離出吲哚酚,吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)形成紫色縮合物。粒細(xì)胞酯酶主要存在于粒細(xì)胞質(zhì)內(nèi),單核細(xì)胞含有少量,淋巴細(xì)胞中無此酶。因此,干化學(xué)法主要測定粒細(xì)胞。甲醛防腐尿液及應(yīng)用某些藥物(如呋喃坦啶)時,可使尿白細(xì)胞呈假陽性。而陳舊性尿液中的膿細(xì)胞,尿中含有大量先鋒Ⅳ和慶大霉素,尿蛋白大于5 g/L,乳糜尿及深棕色尿均可導(dǎo)致尿白細(xì)胞陽性減弱或呈假陰性。由于干化學(xué)測定的原理與顯微鏡計(jì)數(shù)的形態(tài)學(xué)檢查是兩種截然不同的概念,所以有時出現(xiàn)結(jié)果不一致的情況。
4.2 干化學(xué)測定與紅細(xì)胞顯微鏡檢查的關(guān)系 顯微鏡血尿是許多泌尿系統(tǒng)疾病病理變化的初始信號之一,極少量紅細(xì)胞有時只表現(xiàn)為隱血陽性。臨床無癥狀的尿隱血陽性對疾病的早期診斷更為重要。尿隱血檢測包括尿液中的紅細(xì)胞和(或)紅細(xì)胞變形裂解后溢出的血紅蛋白。紅細(xì)胞和血紅蛋白均含有亞鐵血紅素,具有過氧化物酶樣活性,亞鐵血紅素還原試紙帶膜塊上的過氧化物釋放出游離氧,氧化色原顯色。因此尿隱血報(bào)告的陽性程度往往高于顯微鏡檢查的紅細(xì)胞數(shù)。許多患者紅細(xì)胞在腎臟或泌尿道中因滲透壓過低或pH值偏高而破壞,血紅蛋白釋放,出現(xiàn)所謂干化學(xué)檢查的假陽性現(xiàn)象。因此遇到與顯微鏡檢查結(jié)果不符時,一定要結(jié)合臨床加以分析,尋找原因,切不可一概對干化學(xué)法加以否定,更不可武斷地調(diào)節(jié)儀器的靈敏度。尿隱血假陰性主要見于維生素C的干擾所致。假陽性主要是尿液中存在對熱不穩(wěn)定的酶(如過氧化物酶、類過氧化物酶)和肌紅蛋白。前者加熱后酶類破壞即轉(zhuǎn)為陰性,后者是一類特殊的疾病。
4.3 干化學(xué)測定與管型顯微鏡檢查的關(guān)系 尿液干化學(xué)檢查中,沒有管型的檢測項(xiàng)目。管型是尿液檢驗(yàn)中最有意義的成分,是尿液中蛋白質(zhì)、腎小管分泌物、變性的腎上皮細(xì)胞及其剝脫物、紅細(xì)胞或白細(xì)胞及其崩解產(chǎn)物在遠(yuǎn)曲小管、集合管內(nèi)形成的。所以尿液中出現(xiàn)管型時,絕大多數(shù)尿蛋白陽性。尿液中檢出病理性管型表示腎小管有一過性尿潴留,??煞从衬I臟的病變。因此,必須嚴(yán)格按規(guī)定鏡檢,以保證管型不被漏診。
干化學(xué)試紙帶受諸多因素的影響,不同尿液分析儀檢測的靈敏度也有一定差異。目前,任何一臺尿液分析儀只能起顯微鏡檢查的過篩實(shí)驗(yàn),即使可進(jìn)行無玻片鏡檢及細(xì)胞分布直方圖報(bào)告的電腦遙控顯像尿液分析儀,也不能完全取代顯微鏡?;谝陨显颍瑢?shí)驗(yàn)室需要常規(guī)鏡檢的情況至少應(yīng)包括:(1)泌尿系統(tǒng)或可疑泌尿系統(tǒng)疾病的患者;(2)尿蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、亞硝酸鹽有陽性者或四項(xiàng)均陰性而尿維生素C(++)以上或標(biāo)本留取前使用了對尿液檢查有影響的藥物;(3)可疑尿中有管型、腎上皮細(xì)胞、亞硝酸鹽還原酶陰性的細(xì)菌、病理性結(jié)晶等異常成分;(4)尿液混濁或尿色異常者;(5)近期內(nèi)尿檢異常正在治療觀察的患者。
5.1 標(biāo)本的采集與放置 干化學(xué)檢查要求尿液應(yīng)新鮮,最好不要超過2 h。長時間放置的尿標(biāo)本,某些化學(xué)成分或有形成分可能會分解、破壞或轉(zhuǎn)化成其他成分(待測物或非待測物),從而直接或間接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如尿液中大量繁殖的細(xì)菌在葡萄糖和蛋白質(zhì)的分解過程中,細(xì)菌大量增加,葡萄糖和蛋白質(zhì)逐漸減少;紅細(xì)胞無氧酵解過程中對葡萄糖的利用及各種細(xì)胞成分的破壞,都不同程度地增加了實(shí)驗(yàn)的誤差。又如新鮮尿中的酮體形式主要為乙酰乙酸,長時間放置的尿標(biāo)本,乙酰乙酸的含量逐漸降低,而丙酮和β-羥丁酸逐漸增高,由于三種酮體物質(zhì)檢測的靈敏度差異甚大,勢必造成同一份標(biāo)本應(yīng)用同一臺儀器和試紙?jiān)诓煌瑫r間檢測結(jié)果的差異。干化學(xué)檢查更不可應(yīng)用加入防腐劑(如甲苯、甲醛)和抑制劑(如氟化鈉)的尿液,否則加入的化學(xué)試劑將直接影響到某些成分的測定。
5.2 干化學(xué)試紙的保存、浸濕時間及測試溫度 干化學(xué)試紙一旦啟封應(yīng)盡快用完,且每次使用后必須緊塞筒蓋,勿放入冰箱保存,以免被空氣氧化或吸水變質(zhì)。由于各項(xiàng)目的檢測原理不同,延長浸濕時間加之室內(nèi)溫度增高,可使葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽紅素和尿膽原的陽性增強(qiáng),而酮體陽性減弱,pH值降低。禁止用手觸摸試紙帶上任何一個測試膜塊,浸濕后的試紙帶不宜甩動,以免互相污染影響結(jié)果。因此尿液檢查必須標(biāo)準(zhǔn)化,試紙浸濕時間應(yīng)嚴(yán)格控制在2 s或規(guī)定的時間,啟封后應(yīng)在1周內(nèi)用完,保存于室溫在15 ℃~25 ℃的通風(fēng)干燥處為宜。
5.3 使用配套試紙、定期校準(zhǔn)儀器、開展室內(nèi)室間質(zhì)控 由于尿試紙帶各項(xiàng)目的檢測原理不同,同一項(xiàng)目不同廠家的試紙反應(yīng)原理也不盡相同,各膜塊反應(yīng)的靈敏度及色澤變化也存在一定差異。所以不同儀器和試紙對同一標(biāo)本的測定結(jié)果可能存在一定誤差,同一儀器、同一標(biāo)本應(yīng)用不同廠家試紙測定的結(jié)果也可能有一定差別。因此建議各實(shí)驗(yàn)室不可頻繁更換試紙廠家。同時,應(yīng)積極開展室內(nèi)室間質(zhì)量控制。室間質(zhì)控可隨時觀察儀器的重復(fù)性與否,室內(nèi)質(zhì)控可及時發(fā)現(xiàn)儀器的準(zhǔn)確性與否。定期用高低質(zhì)控物作對照,用校正帶校準(zhǔn)儀器,在無可比性對照方法的情況下,不要隨意調(diào)整儀器檢測的靈敏度。
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